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油紅O染色

簡(jiǎn)要描述:油紅O屬于偶氮染料,是很強(qiáng)的脂溶劑和染脂劑,與甘油三酯結(jié)合呈小脂滴狀。脂溶性染料能溶于組織和細(xì)胞中的脂類,它在脂類中的溶解度比在溶劑中大。當(dāng)組織切片置入染液時(shí),染料則離開染液而溶于組織內(nèi)的脂質(zhì)(如脂滴)中,使組織內(nèi)的脂滴呈橘紅色。

  • 更新時(shí)間:2024-10-26 00:00:00
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詳細(xì)介紹

1取材及冷凍

切取組織時(shí)應(yīng)使用鋒利的刀、剪,切取組織塊時(shí),從刀的根部開始向后拉動(dòng)切開組織。組織塊的厚度約為0.2~0.3cm,大小為1.5cm×1.5cm x 0.3cm為宜。將要切取的平面朝下放到塑料包埋盒底部,在液氮表面停留約30秒把組織凍硬,注意停留太久易使組織凍裂。立即把凍硬的組織塊裝入自封袋中保存于-80℃低溫冰箱。

2切片 

切片前將組織樣本置于-20℃冰箱內(nèi)復(fù)溫30 min,切片厚度為5~7 μm,太厚貼片不牢固,更不利于鏡下觀察。包埋可用OCT,也可用膠水代替。用高粘度膠水在支撐架上滴加形成一個(gè)小臺(tái),將組織放上,在組織周圍用膠水包埋一下放在冷臺(tái)上冷凍。包埋使組織上、下方有一定的邊,有利于連續(xù)切片,而且展片時(shí)可以避免組織皺縮。待組織達(dá)適當(dāng)硬度即可切片,切片時(shí)組織的冷凍程度是切片的最關(guān)鍵環(huán)節(jié),凍得過硬,切片呈碎屑狀;凍得不夠,切片呈粥糜狀或切不成片。

3貼片和固定

載玻片必須預(yù)先處理,常用多聚賴氨酸包被。需要注意多聚賴氨酸不可反復(fù)使用,且不能用玻璃容器存放。將切片小心貼附于載玻片上,貼片時(shí)手要穩(wěn),并且手要有一個(gè)向下伸展的動(dòng)作,立即將切片放入固定液中。以往的經(jīng)驗(yàn)用吹風(fēng)機(jī)吹干再固定,但完全干后的組織容易在沖洗時(shí)脫片,并且組織細(xì)胞發(fā)生退行性變;另外,可溶性抗原不能晾干,應(yīng)立即固定。固定液的選擇因抗原而異,但一般抗原可用4℃預(yù)冷的丙酮固定15 min,此固定劑比較溫和,對(duì)抗原保存較好。

4  油紅O染色步驟

(1)切片用4%甲醛固定10分鐘;

(2)蒸餾水洗;

(3)60%異丙醇浸洗;

(4)油紅O染液10分鐘(染液可回收再利用);

(5)60%異丙醇分色至背景無色;

(6)蒸餾水洗;

(7)Mayer蘇木精復(fù)染;

(8)自來水洗(藍(lán)化)1~3分鐘;

(9)蒸餾水洗;

(10)甘油明膠封片。

5 圖像采集

通過顯微鏡拍照,采集分析樣本相關(guān)部位。

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