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原代神經(jīng)干細(xì)胞

簡要描述:

  • 更新時間:2024-10-26 00:00:00
  • 訪  問  量:1278

詳細(xì)介紹

胚胎大鼠腦神經(jīng)干細(xì)胞的分離和培養(yǎng)

1. 犧牲胎齡14-16天的SD大鼠,刮除腹部手術(shù)區(qū)域的毛發(fā),75%乙醇全身浸泡消毒。

2. 解剖孕鼠,取出子宮并沖洗。

3. 取出胚胎,置于含有冰冷的HBSS液平皿中。

4. 手術(shù)顯微鏡下剝離出大腦半球,小心地剝?nèi)ツX膜和血管。

5. 剝?nèi)ツX膜和血管的大腦皮質(zhì),用冰冷的HBSS液清洗三次。

6. 將大腦皮質(zhì)剪成1mm3的小塊,用1ml槍頭輕輕吹打后,使之成為細(xì)胞懸液,并通過70um的篩網(wǎng)過濾。

7. 將收集到的細(xì)胞懸液離心后,用神經(jīng)干細(xì)胞基礎(chǔ)培養(yǎng)液重懸,然后離心,棄掉上清液。

8. 經(jīng)計數(shù)和活力觀察,將細(xì)胞密度調(diào)至1×106/ml,以1.5×105/ml的細(xì)胞密度種入T25培養(yǎng)瓶中,同時加入FGF-2EGF5%CO237℃環(huán)境中培養(yǎng),直到神經(jīng)干細(xì)胞分裂、增殖形成較大的神經(jīng)細(xì)胞球后再作傳代處理。

9. 細(xì)胞傳代,將神經(jīng)細(xì)胞球懸液移至離心管,經(jīng)低速離心后,吸棄上清液,加入神經(jīng)干細(xì)胞完全培養(yǎng)液,用200ul槍頭吹打,使之成為單個細(xì)胞懸液,定量加入神經(jīng)干細(xì)胞完全培養(yǎng)液后,進(jìn)行細(xì)胞計數(shù)和活力觀察。

10. 傳代后的細(xì)胞既可用來誘導(dǎo)分化,也可以繼續(xù)種瓶培養(yǎng),還可以冷凍保存以備后用。

11. 神經(jīng)干細(xì)胞的分化和鑒定。

 

 

 

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