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常見的類器官培養(yǎng)實例之腎臟類器官

更新時間:2023-10-17 14:02:06       點擊次數(shù):884

腎臟是中斷中胚層(intermediate mesoderm,IM)通過IM來源的后腎間質(metanephric mesenchyme,MM)和成形 的輸尿管芽(ureteric bud,UB) 相互作用分化而成。MM來源的腎祖細胞是腎單位的前體,而IM自身則源于后部原條 (posterior primitive streak)。


在經輻照的小鼠胚胎成纖維細胞上培養(yǎng)人類胚胎干細胞鋪板于包含Matrigel的96孔培養(yǎng)板中,過夜培養(yǎng)后加入含有Activin A和BMP-4,或僅含有CHIR 99021的無血清培養(yǎng)基,然后在含有FGF-9和肝素的培養(yǎng)基中誘導中斷中胚層細胞的形成。這些細胞隨后在含有FGF-9、BMP-7和維甲酸(前者用Activin A/BMP-4誘導的細胞)或含有FGF-9和肝素(前者只用CHIR 99021誘導的細胞)的培養(yǎng)基中培養(yǎng)。在誘導腎臟類器官時,將來源于人類胚胎干細胞的腎臟細胞分離成單個細胞,離心形成細胞沉淀,然后將其鋪于覆有IV型膠原蛋白的濾膜上,并使濾膜懸浮在培養(yǎng)基中。該研究成功地利用化學成分明確的培養(yǎng)條件和參與正常胚胎發(fā)育的生長因子,使人類胚胎干細胞分化生成 輸尿管芽和后腎間質,最終在體外自我組織形成含有腎單位的三維結構。

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